熒光定量PCR檢測
熒光定量原理：
熒光定量PCR技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時監控反應過程。隨著PCR 反應的進行，反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一次熒光強度信號，這樣就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，結合相應的軟件對產物進行分析，可以得到熒光擴增曲線，計算待測樣品初始模版的量。
應用：
實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍，運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、絕對定量和定性分析。
服務內容：
1. 客戶提供樣品及檢測基因信息
2. 樣品抽提及反轉錄
3. 引物及探針設計
4. 標準品構建（針對絕對定量）
5. PCR反應條件優化及引物驗證
6. PCR上機正式實驗
7. 實驗數據分析及GraphPad專業繪圖軟件繪制柱狀圖
交付內容：
提供數據及實驗報告，包括實驗方法、步驟、所用試劑、儀器、RNA電泳圖片、擴增曲線、溶解曲線及GraphPad專業繪圖軟件繪制柱狀圖。
業務范圍：SYBR-Green染料法對DNA/RNA進行實時熒光定量PCR檢測，包括mRNA、miRNA和DNA的相對和絕對定量分析。
相對定量：通過2－ΔΔCt法計算比較目的基因的表達差異。
絕對定量：需要先制備標準質粒進行等比例稀釋，與待測目的基因同時進行PCR，通過比對標準曲線計算出樣品中特定基因的拷貝數、摩爾數或者微克數等。
Western Blot檢測
原理：
WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到硝酸纖維素薄膜上，以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以硝酸纖維素薄膜上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與二抗體起反應，經過底物顯色以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白。
應用：
通過抗原抗體反應對目標蛋白的表達進行半定量檢測，還可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續分析。
服務內容：
1. 配置膠
2. 樣品處理，蛋白抽提定量
3. SDS-PAGE電泳
4. 轉膜
5. 免疫學檢測
6. 圖片分析，整理報告
交付內容：
交付實驗報告包括實驗方法、所用試劑、儀器及曝光結果（掃描圖）。
業務范圍：總蛋白、磷酸化蛋白
單克隆抗體生產
大規模單克隆抗體生產：目前主要有兩種方式，一是腹水制備法，另一種是轉瓶培養法。
腹水制備法：將雜交瘤細胞株進行體外培養至一定濃度，再將雜交瘤細胞注入小鼠腹腔中，產生腹水，從腹水中春華單克隆抗體。每只小鼠可以產生3~8ml腹水，抗體含量可以達到1~10mg/ml。腹水制備的周期為3~4周。腹水制備法具備成本低、產量高，時間快等優點，是目前主要的大規模看題生產方式。
轉瓶培養法：將雜交瘤細胞進行大規模體外培養，從培養基中純化抗體。抗體含量可以達到20~80ml/L。轉瓶制備法具有抗體品質高、不含小鼠雜蛋白，不含動物病毒等優點。
客戶提交樣本：
1、雜交瘤細胞活力至少大于80%的雜交瘤細胞株
2、雜交瘤細胞培養基品牌、貨號、配制方法
交付結果：
1、純化好的單克隆抗體，純度90%以上
2、最終純化實驗報告，其中報告純化SDS-PAGE圖和終濃度QC圖
多克隆抗體制備
多克隆抗體存在于免疫動物的血清中，可以從血清中純化獲得。多克隆抗體能識別多個抗原位點，可用于多種免疫學反應，并且制備時間短，成本低，因此被廣泛應用于免疫學研究領域和免疫學診斷領域。
服務內容
1、抗原的制備
多肽抗原合成→蛋白抗原制備→其他抗原制備
2、免疫
我們提供經過優化和驗證的免疫方案，也可以根據客戶的要求進行免疫。
3、抗血清的生產
4、抗體的純化
ProteinA/G純化、特異性親和純化
交付結果：
1、提供的多克隆抗體制備服務，多克隆的抗體的效價達到1：:16000以上
2、對于蛋白抗原的多克隆抗體，保證western blot檢測結果為陽性。蛋白抗原的純度大于85%。
磷酸化抗體定制服務
磷酸化抗體具體特異性識別磷酸化氨基酸的位點，可以確定蛋白質是否磷酸化，對于磷酸化蛋白可進行定性及定量分析。
磷酸化多克隆抗體制備流程：
1、磷酸化多肽的設計合成
2、合成多肽與載體蛋白偶聯
3、動物免疫、抗血清制備
4、抗體的純化及特異性親和純化
5、效價檢測
磷酸化單克隆抗體制備流程：
1、磷酸化多肽的設計合成
2、合成多肽與載體蛋白偶聯
3、動物免疫與檢測
4、細胞融合
5、篩選單克隆細胞株
6、效價檢測
掃一掃微信客服
掃一掃微信客服